Тирзепатид — это новый агонист двойных рецепторов, нацеленный как на GIP (желудочный ингибирующий пептид), так и на GLP-1 (глюкагоноподобный пептид-1), разработанный компанией Eli Lilly и успешно продаваемый для таргетного лечения диабета, неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) и контроля хронического веса, с периодом полувыведения 116,7 часов. После его одобрения для лечения диабета в 2022 году он был дополнительно одобрен для снижения веса в США в ноябре 2023 года. Крупномасштабное клиническое исследование показало, что пациенты, получавшие этот препарат, достигли максимального снижения веса до 21%. Молекула состоит из пептидного остова, состоящего из 39 аминокислот, и боковой цепи у остатка Lys20. Из этих 39 аминокислот 37 встречаются в природе (или кодируются), а две не встречаются в природе: некодирующие остатки аминоизомасляной кислоты в положениях 2 и 13.
Для достижения двойной активности Тирзепатид не только включает аминокислотные остатки, полученные из GLP-1 и GIP, но также использует несколько уникальных аминокислотных остатков. Его пептидная структура в основном происходит от GLP-1, GIP, эксенатида и семаглутида, причем некоторые остатки являются отличительными.
В исследованиях процесса синтеза тирзепатида использовались многочисленные методы получения синтетических пептидов. Выбор подходящего метода синтеза обычно основан на молекулярных характеристиках, таких как наличие некодирующих аминокислот, непептидных боковых цепей и количества участвующих аминокислот.
Bиосинтез：Рекомбинантные методы, обычно используемые для макромолекул (таких как моноклональные антитела), также могут применяться к более мелким пептидам. При этом подходе внешнюю ДНК вводят в клеточные линии Escherichia coli или млекопитающих (яичники китайского хомячка, CHO), где клетки синтезируют пептиды. Хотя сроки разработки обычно больше, чем у традиционных методов синтеза, этот подход успешно применяется для полусинтетических пептидов (например, семаглутида, инсулина деглудек и лираглутида). Двумя недостатками этого метода являются: (1) сложность введения аминокислот, не кодируемых последовательностями ДНК; и (2) необходимость пострекомбинантных синтетических модификаций для включения непептидных боковых цепей.
CгеморрагическийSсинтез：
Твердофазный пептидный синтез (SPPS) оказался эффективным для многих пептидов среднего размера (например,Lизинаптид иEксенатид), в том числе синтезированные с использованием некодирующих аминокислот. К сожалению, для более крупных пептидов (обычно >30 аминокислот) SPPS часто страдает от низких выходов процесса и плохой чистоты. Более того, из-за необходимости безошибочного выполнения множества последовательных единичных операций (с предполагаемой частотой неудач 20% для пептидов, содержащих более 30 аминокислот), это несет в себе значительные производственные риски.
Жидкофазный пептидный синтез (LPPS). Этот метод аналогичен SPPS, за исключением того, что растущие пептиды не связываются со смолой, а их С-концы представляют собой нереакционноспособные амиды или защищенные эфиры. Он хорошо подходит для синтеза более мелких пептидов (≤10 аминокислот), но выход и чистота быстро снижаются по мере увеличения длины пептида.
Гибридный метод SPPS/LPPS. В этом подходе используется SPPS для получения коротких пептидных фрагментов высокой чистоты и хорошо изученных промежуточных продуктов осаждения, что позволяет избежать многих производственных рисков и проблем с чистотой, присущих более длинным конструкциям SPPS. Впоследствии защищенные фрагменты соединяются в жидкой фазе.
Гибридный метод SPPS/LPPS, сочетающий в себе преимущества обоих методов, представляет собой превосходный подход. Для реализации этой гибридной стратегии сначала необходимо выбрать соответствующие фрагменты, синтезированные с помощью LPPS. Ключевые факторы при выборе фрагментов включают длину пептида, общее количество фрагментов, идентичность аминокислот в сайтах расщепления и характеристики боковой цепи. Размер и количество фрагментов имеют решающее значение; хотя более мелкие фрагменты могут достичь высокой чистоты, они требуют более сложных производственных процессов, включающих дополнительные этапы LPPS. И наоборот, меньшее количество крупных фрагментов создает более серьезные производственные проблемы и создает более высокие риски для достижения высокой чистоты. Оценив эти факторы, исследователи Eli Lilly выбрали четыре фрагмента для синтеза тилитропина. Что касается сайтов расщепления, ключевым фактором была диастереомерия С-концевых аминокислот в каждом фрагменте, поскольку амидный остов облегчает диастереомеризациюα-стереоцентр легче по сравнению с Fmoc-защищенными аминокислотами, используемыми в конструкциях SPPS. После тщательной оценки различных фрагментов в конечном итоге были выбраны четыре конкретных фрагмента (рис. 2).–5). Все четыре фрагмента были синтезированы с помощью SPPS, легко разделяются в виде твердых продуктов и достигают исключительно высокого уровня чистоты (97,5–99,5%).
Далее фрагмент 2–5, объединяются посредством четырехэтапного процесса LPPS.
Шаг 1: Соедините первые два фрагмента, 2 и 3, представляющие аминокислоты 30.–39 и 22–29 соответственно. Приготовить отдельные растворы фрагментов 2 и 3 в диметилсульфоксиде (ДМСО) и ацетонитриле (АКН), а также ПиОксима и чистого диизопропилэтиламина в АЦН и слить их вместе перед подачей в реактор поршневого типа (ПФР) 27 для онлайн-смешивания для обеспечения однородности.；
Шаг 2: Полученные аминокислоты 22–39 (Соединение 6) затем соединили с Фрагментом 4 с получением аминокислот 15.–39 (Соединение 7)；
Шаг 3: Полученная аминокислотная последовательность 15–39 (Соединение 7) соединили с фрагментом 5 с получением Вос-защищенного тилдроптида.；
Шаг 4: Удалите защитное покрытие, чтобы получить Тирзепатид..
Нанофильтрация — это мембранная технология, которая разделяет растворенные вещества в растворах на основе молекулярной массы и гидрофобности. Неочищенный реакционный раствор проходит через мембрану, удаляя примеси с низкой молекулярной массой, такие как дибензофурен (DBF), диэтиламин (DEA) и побочные продукты, связанные с PyOxim (PyO), сохраняя при этом целевые пептиды. Выбор подходящего размера пор имеет решающее значение, требуя баланса между низким потоком (для слишком маленьких пор) и потерей пептидов (для слишком больших пор). Эта технология обеспечивает крупномасштабное производство со значительно упрощенными рабочими процедурами.
Поскольку Тирзепатид синтезируется исключительно химическим путем, существует множество производителей, производящих его активный фармацевтический ингредиент (API), что приводит к жесткой конкуренции. В настоящее время API Тирзепатид производится внутри страны компанией Hequan Pharmaceutical и экспортируется за границу для приготовления рецептур.
Ссылки：Орг. Процесс Рез. Дев. 2021, 25, 1628−1636
Связаться с нами:
НуждатьсяТирзепатиддля разработки пептидных API, квалификации эталонных стандартов или программ биоаналогов? Cosperpharm обеспечивает высокие‑чистота синтетическая или рекомбинантнаяТирзепатид с полным анализом ВЭЖХ, МС и аминокислот, а также стабильностью и нормативной документацией. От миллиграммов для исследований и разработок до коммерческих килограммов — мы предлагаем гибкие поставки, прозрачные цены и техническую поддержку для синтеза и контроля примесей. Свяжитесь с нами через наш сайт или по электронной почте– мы отвечаем в течение 24 часов, предоставляя индивидуальные расценки и реалистичные сроки выполнения заказов. Позвольте Cosperpharm поддержать ваш проект по терипаратиду от лаборатории до рынка.
Телефон: +86-18986204913
Тел: +86-027-83338163
Электронная почта: info@cosperpharma.com.
-
