Фоновая технология
Кагрилинтид — новый ацилированный аналог амилина длительного действия. Являясь неселективным агонистом рецептора амилина (AMYR) и рецептора, связанного с белком G-кальцитонина (CTR), он представляет собой циклический полипептид, состоящий из 38 аминокислот. Его последовательность содержит 38 аминокислот и пару дисульфидных связей. Кагрилинтид может значительно снизить массу тела и потребление пищи, а также имеет потенциал в исследованиях ожирения. Амилин — еще один гормон, связанный с голодом и насыщением вне сигнального пути GLP-1.
Кагрилинтид может снижать потребление энергии, регулировать выбор и предпочтения пищи, оказывать эффект регулирования уровня глюкозы за счет секреции совместно с инсулином, ингибировать постпрандиальное высвобождение глюкагона и задерживать опорожнение желудка. Он имеет очевидные преимущества при лечении диабета, ожирения, метаболического синдрома, сердечно-сосудистых заболеваний и других аспектов, а также имеет широкий спрос и перспективы применения.
Химическая структурная формула кагрилинтида
Основная информация
АнглийскийNя：Кагрилинтид
Номер компании：GT-F064
КАС：1415456-99-3
Sпоследовательность：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2 (дисульфидный мостик: cys4-cys9)
MглазковыйFормула：C194H312N54O59S2
MглазковыйМасса：4409.01
Сырье, используемое дляКагрилинтид
Синтетический маршрут
Схема приготовления кагрилинтида
(1)ПодготовкаКагрилинтидПептидная смола
Возьмите 1,5 ммоль первой защищенной аминокислоты и 1,5 ммоль НОВТ, растворите соответствующим количеством ДМФ и охладите до 0–15°С; возьмите еще 1,5 ммоль DIC, медленно добавьте его к раствору защищенной аминокислоты в ДМФ при перемешивании и перемешивайте реакцию в течение 10 минут при температуре 0–15°C до получения раствора активированной защищенной аминокислоты, который отставляют в сторону.
Берут 0,5 ммоль аминосмолы (степень замещения 0,42 ммоль/г), набухают раствором ДМФ в течение 60 минут, снимают защиту с помощью 20% раствора Пип/ДМФ в течение 30 минут, промывают и фильтруют, чтобы получить смолу, подлежащую реакции.
Добавьте раствор активированной первой защищенной аминокислоты к смоле, подлежащей реакции, проведите реакцию сочетания при 25–35 ℃ в течение 120–300 минут, отфильтруйте и промойте, чтобы получить смолу, содержащую 1 защищенную аминокислоту: Fmoc-Pro-Resin.
Используя тот же метод, что и выше, последовательно получите доступ к соответствующим защищенным аминокислотам со 2-й по 38-ю или фрагментам, упомянутым выше.:Fmoc- Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Вал-ОН，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Иле-ОН，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Цис(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Цис(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，Моно-трет-бутилэйкозандиоат, с получением 4,98 г пептидной смолы кармеглиптина.
(2)Подготовка сырой нефтиКагрилинтид линейный пептид
Возьмите 4,49 г пептидной смолы карфилзомиба, добавьте смешанный раствор TFA, соотношение смешанного раствора TFA:EDT/Tis/фенол/H₂O = 87,5:2,5:5:2,5:2,5, доза составляет 8 мл на грамм смолы; перемешивают реакцию при 20~30°C в течение 3 часов, фильтруют реакционную смесь через воронку с песком, собирают фильтрат, 3 раза промывают смолу небольшим количеством ТФУ, объединяют фильтраты, добавляют МТБЭ для осаждения, 3 раза промывают осадок МТБЭ и высушивают насосом с получением не совсем белого порошка, который представляет собой 2,08 г неочищенного линейного пептида карфилзомиба.
(3)Приготовление раствора неочищенного циклического пептида кагрилинтида
Возьмите 0,50 г сырого линейногоCпептид агрилинтида, приготовьте раствор сырого линейного пептида в концентрации 5,0 мг/мл, добавьте по каплям 5 мл раствора ДМСО при перемешивании и проведите реакцию при 20 ~ 30 ℃ в течение 20 часов, чтобы получить раствор сырого циклического пептида кагрилинтида.
(4)Приготовление рафинированногоCагрилинтидный пептид
Возьмите сырую нефтьCРаствор циклического пептида арраглитида и отфильтровать его с помощью смешанной микропористой фильтрующей мембраны с размером пор 0,45 мкм.；
Очистите и подготовьте с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии и соберитеCфракции арраглиптина；
Для замены буфера использовали высокоэффективную жидкостную хроматографию. Основной пик после замены буфера собирали и его чистоту определяли с помощью аналитической жидкостной хроматографии. Растворы основных пиков после замены буфера объединяли, концентрировали при пониженном давлении с получением водного уксуснокислого раствора карботида, который лиофилизировали с получением 152,18 мг очищенного карботида с чистотой 99,58%, максимальным содержанием одиночной примеси 0,09%, общим выходом 31,87% и молекулярной массой 4409,0.
ВЭЖХ диаграмма
МС-диаграмма
Приведенные выше примеры показывают, что по сравнению с процессом поэтапного связывающего синтеза продукт, полученный способом, предусмотренным настоящим изобретением, имеет чистоту более 99,0%, а содержание каждой отдельной примеси составляет менее 0,1%, что улучшает качество продукта и общий выход. Процесс прост и удобен в управлении, имеет высокую степень индустриализации, имеет большую практическую ценность и перспективы применения.
Связаться с нами
Телефон: +86-18986204913
Тел: +86-027-83338163
Электронная почта: info@cosperpharma.com.
