5-аминофлуоресцеин

5-аминофлуоресцеин (также называемый 5-AF или флуоресцеинамин) широко используется в качестве реагента для флуоресцентной маркировки. Первичный амин 5-аминофлуоресцеина может реагировать с карбоксильными группами (посредством активации EDC/NHS), альдегидами, кетонами или активированными эфирами (например, эфирами NHS) с образованием стабильных амидных или иминных связей. Он демонстрирует максимум возбуждения при ~ 490 нм (λmax = 496 нм в боратном буфере с pH 8,5) и максимум эмиссии при ~ 515 нм, обеспечивая ярко-зеленый сигнал с хорошей фотостабильностью и стоксовым сдвигом около 40 нм. Интенсивность его флуоресценции зависит от pH и заметно возрастает в щелочных условиях (pH 8-9), что связано с изменением протонированного состояния аминогруппы.

5-аминофлуоресцеин нашел широкое применение в биологических и медицинских исследованиях — от маркировки белков и антител до создания систем адресной доставки лекарств и флуоресцентных сенсоров. 5-аминофлуоресцеин также является ключевым промежуточным продуктом в синтезе изотиоцианата флуоресцеина (FITC изомер I), одного из самых популярных реагентов для мечения белков.

Параметры продукта

Примечания по подготовке и хранению

5‑AF обычно синтезируют, начиная с 4‑нитрофталевой кислоты с последующим восстановлением (например, гидразином/FeOOH) и конденсацией с резорцином в метансульфоновой кислоте. Сырой продукт представляет собой смесь 5- и 6-изомеров, которые разделяются кристаллизацией. Современные методы (микроволновые или ферментативные) могут повысить урожайность и сократить количество побочных продуктов. Окончательная очистка с помощью ВЭЖХ обеспечивает чистоту ≥95%, структура подтверждается ЯМР и МС.

Хранение – Состав чувствителен к свету, воздуху и влаге. Хранить в герметичном контейнере, продутом аргоном, при температуре 4°C в темноте. При длительном хранении (>6 месяцев) рекомендуется температура -20°C в виде порошка (стабилен не менее 3 лет). Растворы в ДМСО можно хранить при температуре -80°С в течение 6 месяцев или при температуре -20°С в течение 1 месяца. Избегайте повторяющихся циклов замораживания-оттаивания. Транспортировка при температуре окружающей среды допускается, если она защищена от света и влаги.

Часто задаваемые вопросы (FAQ)

Вопрос 1: В чем разница между 5-аминофлуоресцеином (5-AF) и FITC? Как мне выбрать?

Ответ: Оба являются зелеными флуоресцентными красителями, но их реакционноспособные группы различаются.

● 5‑AF содержит первичный амин (–NH₂). Перед конъюгацией требуется активация карбоксильной группы мишени (с использованием EDC/NHS). Лучше всего подходит для маркировки молекул, которые уже содержат карбоксильную группу.

● FITC имеет изотиоцианатную группу (–N=C=S), которая непосредственно реагирует с аминами на мишени (например, остатками лизина в белках) – предварительная активация не требуется. FITC более удобен для рутинного мечения белков.

● Выберите 5-AF, если вам нужна определенная ориентированная конъюгация (например, через карбоксильную ручку) или если вы планируете синтезировать специальные флуоресцентные производные. FITC, как правило, проще для прямого мечения антител.

Вопрос 2: Каковы типичные условия реакции для мечения биомолекул 5‑AF?

A: Наиболее распространенным методом является амидное связывание: активируйте карбоксильные группы целевой молекулы с помощью EDC и NHS (в буфере MES или PBS, pH 5,5–6,5), затем добавьте 5‑AF и доведите pH до 7,5–8,5. Инкубируйте при комнатной температуре или 37°C в течение 2–4 часов. Для мишеней, содержащих альдегиды (например, гликопротеинов), используйте восстановительное аминирование цианоборгидридом натрия. Непрореагировавший краситель можно удалить обессоливанием или диализом. Молярное соотношение красителя к белку от 5:1 до 20:1 является хорошей отправной точкой.

Почему Косперфарм? – Наши конкурентные преимущества

Связаться с нами

Если вам нужен небольшой образец для пилотного эксперимента или большие количества для коммерческого производства, Cosperpharm готов вас поддержать. Свяжитесь с нами сегодня, чтобы обсудить ваши требования к 5-аминофлуоресцеину – и давайте посмотрим, как мы можем помочь продвинуть ваш проект.