2'-O-Метил-rA(N-Bz)фосфорамидит

2'-O-Метил-rA(N-Bz) Фосфорамидит представляет собой модифицированный мономер фосфорамидита, который можно использовать для синтеза олигонуклеотидов. 2'-O-метиловая модификация придает олигонуклеотидам значительную нуклеазную устойчивость, сохраняя при этом свойства водородных связей дуплексов РНК/РНК более точно, чем гибридов ДНК/РНК. В приложениях РНК-интерференции (РНКи) 2'-O-метил-rA(N-Bz)фосфорамидит часто включается в смысловые и антисмысловые цепи дуплексов малых интерферирующих РНК (миРНК) для повышения стабильности сыворотки и уменьшения нецелевых эффектов без ущерба для активности РНКи. 2'-O-Метил-rA(N-Bz) Фосфорамидит также служит важным строительным блоком в химическом синтезе олигонуклеотидов РНК, содержащих сайт-специфические модификации 2'-O-метиладенозина; защитные группы (DMT на 5', Bz на N6, фосфорамидит CE на 3') позволяют поэтапно собирать цепи РНК с высокой точностью и контролировать их на автоматических синтезаторах ДНК/РНК. Помимо терапии РНК, 2'-O-метил-rA(N-Bz) фосфорамидит нашел применение в синтезе моделей фосфатно-разветвленных РНК для изучения необычной архитектуры РНК и для приготовления термостабилизированных флуоресцентных олигонуклеотидных зондов.

Параметры продукта

Почему Косперфарм? – Наши конкурентные преимущества

Преимущества продукта

1. 2'-О-метиловая модификация для нуклеазной устойчивости и термической стабильности.

Модификация 2'-O-метила в 2'-положении рибозы является одной из наиболее широко подтвержденных химических модификаций в олигонуклеотидной терапии. Олигонуклеотиды, включающие 2'-O-метил-rA(N-Bz)фосфорамидит, проявляют заметно повышенную устойчивость к эндо- и экзонуклеазам по сравнению с немодифицированной РНК, с улучшенной термической стабильностью дуплексов РНК/РНК (увеличение Tm) без ущерба для специфичности спаривания оснований Уотсона-Крика. Эта модификация была успешно использована в одобренных FDA олигонуклеотидных препаратах и ​​многочисленных кандидатах на клиническую стадию.

2. Защита N6-бензоила для точного синтеза

Бензоильная (Bz) защитная группа экзоциклического амина N6 аденинового основания предотвращает нежелательные побочные реакции во время цикла сочетания фосфорамидита, такие как события разветвления или обрыва цепи, вызванные депуринированием или ацилированием. Группа Bz полностью удаляется в стандартных условиях снятия защиты с олигонуклеотидов (концентрированный аммиак, 55°C, 8–16 часов или АМА), получая нативное адениновое основание без обнаруживаемых побочных продуктов.

3. Предварительная организация конформации сахара C3'-эндо.

Замещение 2'-O-метила фиксирует сахар рибозы в C3'-эндо (северной) конформации — той же конформации, которую принимает РНК в дуплексах A-формы. Эта конформационная предварительная организация снижает энтропийный штраф при гибридизации с комплементарными РНК-мишенями, что приводит к более высокой аффинности связывания (более высокому Tm) для 2'-O-метилмодифицированных олигонуклеотидов по сравнению с ДНК или немодифицированной РНК той же последовательности.

4. Совместимость стандартных защитных групп для автоматического синтеза.

2'-O-Метил-rA(N-Bz) фосфорамидит несет те же защитные группы 5'-O-DMT и N6-Bz, которые используются в стандартных фосфорамидитах РНК, а также β-цианоэтил (CE) фосфорамидит в 3'-положении. Такая конструкция обеспечивает плавную интеграцию в существующие рабочие процессы автоматизированного синтезатора ДНК/РНК без необходимости применения специальных протоколов снятия защиты или изменения условий связывания.

5. Широкая терапевтическая полезность на всех олигонуклеотидных платформах.

2'-O-Метил-rA(N-Bz) Фосфорамидит используется на нескольких терапевтических платформах олигонуклеотидов: миРНК (модификации смысловой и антисмысловой цепи), антисмысловые олигонуклеотиды (ASO) для подавления генов, аптамеры для целевой доставки и диагностических применений, а также модифицированные РНК-зонды для молекулярной диагностики. Модификация 2'-O-метила также широко используется в направляющих РНК CRISPR-Cas для повышения стабильности и эффективности редактирования.

Сценарии применения

1. Терапевтическая разработка миРНК

2'-O-метил-rA(N-Bz) фосфорамидит используется для введения модификаций 2'-O-метиладенозина в смысловые и/или антисмысловые цепи дуплексов малых интерферирующих РНК (миРНК) для повышения стабильности сыворотки, уменьшения нецелевых эффектов, опосредованных механизмом РНКи (например, загрузка пассажирской цепи), и уменьшения иммуностимуляции (активация TLR7/8). Модификация 2'-O-метила является стандартным компонентом многих клинически продвинутых платформ siRNA.

2. Производство антисмысловых олигонуклеотидов (АСО)

2′-O-Methyl-rA(N-Bz) Phosphoramidite is widely incorporated into antisense oligonucleotides for gene silencing applications. Модификация 2'-O-метил придает нуклеазную устойчивость к ASO в биологических жидкостях и повышает аффинность связывания с комплементарными мишенями РНК, не нарушая механизмы расщепления, опосредованные РНКазой H (при размещении в конструкциях 2'-O-метил/2'-дезокси-гапмер).

3. Химический синтез олигонуклеотидов РНК

2'-O-Метил-rA(N-Bz) Фосфорамидит служит строительным блоком для твердофазного химического синтеза олигонуклеотидов РНК, содержащих сайт-специфические остатки 2'-O-метиладенозина. Защитные группы (5'-O-DMT, N6-Bz, фосфорамидит CE) совместимы со стандартными циклами синтеза РНК и условиями снятия защиты (NH₃, 55°C, 8–16 часов или AMA), что обеспечивает плавную интеграцию в установленные рабочие процессы синтеза.

4. Дизайн флуоресцентного олигонуклеотидного зонда

Модификации 2'-O-метила улучшают термическую стабильность флуоресцентных зондов (например, молекулярных маяков, зондов TaqMan), используемых в ПЦР в реальном времени и гибридизации in situ. 2'-O-Метил-rA(N-Bz) Фосфорамидит позволяет вводить стабилизирующие модификации в последовательности зондов, увеличивая соотношение сигнал/шум и обеспечивая более надежное обнаружение мишеней РНК с низким содержанием.

5. Разработка аптамеров. Химически модифицированные аптамеры, включающие

2'-О-метилнуклеотиды демонстрируют улучшенную устойчивость к нуклеазам, увеличенный период полураспада in vivo и повышенную аффинность связывания с мишенью по сравнению с немодифицированными РНК-аптамерами. 2'-O-метил-rA(N-Bz) фосфорамидит является ключевым строительным блоком для создания библиотек аптамеров, модифицированных 2'-O-метилом, посредством твердофазного синтеза.

6. Модификация направляющей РНК CRISPR‑Cas (гРНК).

2'-О-метиловые модификации, помещенные в определенные положения гРНК CRISPR-Cas, могут повысить стабильность, снизить иммуногенность и улучшить эффективность редактирования в клетках и in vivo. 2'-O-метил-rA(N-Bz) фосфорамидит позволяет сайт-специфическое введение остатков 2'-O-метиладенозина в химически синтезированные гРНК.

7. Исследование фосфатно-разветвленной РНК

Исследователи, изучающие необычные архитектуры РНК, такие как РНК с фосфатными разветвлениями, используют 2'-O-метил-rA(N-Bz) фосфорамидит для получения модельных олигонуклеотидов, содержащих одну свободную 2'-ОН-группу, для исследования гидролитической стабильности разветвленных фосфотриэфирных связей в физиологических условиях.

8. Исследования термостабильности модифицированных олигонуклеотидов

2'-O-Метил-rA(N-Bz) Фосфорамидит используется в систематических исследованиях термической стабильности (Tm) модифицированных олигонуклеотидных дуплексов, включая характеристику позиционных эффектов 2'-O-метиловых модификаций на температуру плавления дуплекса и термодинамику гибридизации.

9. Твердофазный синтез олигонуклеотидов

Разработка процесса Химики-технологи и специалисты по синтезу олигонуклеотидов используют 2'-O-метил-rA(N-Bz) фосфорамидит для оптимизации условий связывания, протоколов снятия защиты и методов очистки для крупномасштабного производства терапевтических средств на основе 2'-O-метил-модифицированных нуклеиновых кислот. Cosperpharm предоставляет аналитические данные по конкретным партиям для поддержки валидации процесса и масштабирования деятельности.

10. Разработка аналитического метода контроля качества олигонуклеотидов.

2'-O-Метил-rA(N-Bz) Фосфорамидит используется в качестве эталонного стандарта при разработке методов ВЭЖХ и ЖХ-МС для количественного определения содержания модифицированных нуклеозидов в олигонуклеотидных лекарственных субстанциях и лекарственных препаратах, а также для выявления примесей, связанных с синтезом (например, неполного удаления ДМТ, продуктов депуринации, побочных продуктов окисления фосфита).

Связаться с нами

Need reliable, high‑purity 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) Phosphoramidite for your next oligonucleotide synthesis project? Команда Cosperpharm готова помочь со спецификациями продукции, документацией и решениями для цепочки поставок, адаптированными к вашему применению.